相信有很多小伙伴會好奇逆轉(zhuǎn)錄病毒包裝服務(wù)是用來干嘛的呢？下面跟著小編一起去看看吧！病毒載體是人為調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)或機(jī)體內(nèi)基因表達(dá)常用的方式之一，通過病毒感染的方式可以將外源的基因片段穩(wěn)定整合到宿主細(xì)胞基因組內(nèi)，從而達(dá)到持續(xù)、穩(wěn)定的表達(dá)外源基因的目的。
什么是逆轉(zhuǎn)錄病毒包裝服務(wù)：
10cm大皿接種5×106個Plat-E細(xì)胞，加入10ml含10%FBS的DMEM培養(yǎng)基過夜，12h后顯微鏡下觀察細(xì)胞密度80%-90%為宜。15ug目的質(zhì)粒和500ulOpti-MEM培養(yǎng)基混合，同時45ug轉(zhuǎn)染試劑和500ulOpti-MEM培養(yǎng)基混合，5min后轉(zhuǎn)染試劑Opti-MEM加至質(zhì)粒Opti-MEM中，靜置20min，將混合物滴入Plat-E細(xì)胞中混勻，37℃5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，8-10h后更換新鮮DMEM培養(yǎng)基。轉(zhuǎn)染48h，72h后收集病毒上清，0.44um濾器過濾-80℃保存。
慢病毒（Lentivirus）是逆轉(zhuǎn)錄病毒的一種，它能夠?qū)谢驅(qū)氲揭恍┹^難轉(zhuǎn)染的細(xì)胞，如原代細(xì)胞等，并且將靶基因隨機(jī)整合到宿主的基因組中，從而大大增加了轉(zhuǎn)染效率，并且能夠在細(xì)胞系中穩(wěn)定表達(dá)若干代，可以進(jìn)行穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株的篩選。因?yàn)槭请S機(jī)整合，也有不確定因素，有些公司還能提供定點(diǎn)整合技術(shù)，將靶基因定點(diǎn)整合到基因組特定的部位，從而保證其高效表達(dá)并且對細(xì)胞不產(chǎn)生隨機(jī)整合可能產(chǎn)生的傷害。
慢病毒載體基因組是正鏈RNA，其基因組進(jìn)入細(xì)胞后，在細(xì)胞漿中被其自身攜帶的逆轉(zhuǎn)錄酶逆轉(zhuǎn)錄為DNA，形成DNA整合前復(fù)合體，進(jìn)入細(xì)胞核后，DNA整合到細(xì)胞基因組中。整合后的DNA轉(zhuǎn)錄mRNA，回到細(xì)胞漿中，表達(dá)目的蛋白或產(chǎn)生RNAi干擾。
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